《最后的晚餐》宽420厘米，长910厘米[2] 。达·芬奇不仅在绘画技艺上力求创新，在画面的布局上也别具新意。一直以来，画面布局都是耶稣弟子们坐成一排，耶稣独坐一端。达·芬奇却分坐于耶稣两边，耶稣孤寂地坐在中间，他的脸被身后明亮的窗户映照，显得庄严肃穆。背景强烈的对比让人们把所有的注意力全部集中于耶稣身上。耶稣旁边那些躁动的弟子们，每个人的面部表情、眼神、动作各不相同。尤其是慌乱的犹大，手肘碰倒了盐瓶，身体后仰，满脸的惊恐与不安。 画中人物从左到右是：巴多罗买（Bartholomeus）、小雅各（Jacobus Alphei）、安德烈（Andreas）、叛徒犹大（Judas Scariotes）、西门彼得（伯多禄 Simon Petrus）、约翰（若望 Iohannes Zebedaei）、耶稣（ Jesus）、多马（多默 Thomas）、大雅各（Jacobus Zebedaei）、腓力（Philippus）、马太（玛窦 Mattheus）、奋锐党的西门（热诚者西满 Simon Cananeus）、达太（圣犹大 Thaddeus）。